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紫外分光光度法测定葎草中总黄酮含量
发布时间:2018-12-06 点击次数:39次

 探讨葎草中总黄酮含量的测定方法。方法: 以芦丁为对照品,采用超声提取法提取总黄酮,用亚硝酸钠-氯化铝-氢氧化钠显色法,最显色条件: 亚硝酸钠质量浓度 5%、氯化铝质量浓度 10%、氢氧化钠质量浓度 4%。通过紫外可见分光光度计测定律草中总黄酮的含量。结果: 检测波长为 510 nm,芦丁在浓度 0. 024 1 ~0. 064 0 g·L-1 范围内呈良好的线性关系,回归方程: y =0. 081 7x -0. 001 8( R 2 =0. 999 5) ,1 h 内基本稳定( RSD =0. 364%) ,重复性较好( RSD =0. 600 %) ,加样回收率为 99. 46%( RSD =1. 685%) 。葎草[Humulus scandends(lour. )Merr.]又名拉拉秧、拉拉藤等,为桑科植物的全草 [1] ,分布在我国东北、华北、中南、西南等地区。另外在亚洲、北美、非洲等地区也均有分布 [2] 。在研究葎草提取物的抗菌作用时发现 [3] ,其水提取液对革兰阳性菌具有较强的抗菌活性,并证实抗菌作用与葎草中所含的黄酮类成分有关。本研究通过采用超声提取法提取葎草中的总黄酮,以芦丁为对照品,以亚硝酸钠-氯化铝-氢氧化钠为显色剂,建立紫外可见分光光度法测定葎草中总黄酮含量的方法,从而为合理利用葎草提供科学依据。

1 仪器与材料
752N-紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器88必发娱乐城);SK8200HPULTRASONICINSTRUMENT(上海科导超声仪器88必发娱乐城);AX200 万分之一电子天平(SHMADZU COR-PORATION JAPAN)。芦丁准品(由中国生物制品检定所鉴定);葎草(10 月采摘于牡丹江市北山);亚硝酸钠、三氯化铝、氢氧化钠和乙
醇等(所用试剂均为分析纯)。
2 方法与结果
2. 1 芦丁对照品溶液的制备
精密称取经干燥至恒质量的芦丁标准品 20 mg,置于 100mL 容量瓶中,加80%乙醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液。
2. 2 葎草供试品溶液的制备
取葎草样品放入研钵中粉碎过筛(40 目),精密称取约 1g 并置于索氏提取器中,加石油醚 100 mL,回流加热,至提取液无色,弃去石油醚提取液。待药渣挥散干后,干燥至恒质量,转移到平底烧瓶中,加 80%乙醇50 mL 密塞称质量,超声提取 0. 5 h,加活性炭脱色,过滤,取滤液。连续提取 5 次,合并各分滤液。
2. 3 测定波长的选择取芦丁对照品溶液 5 mL 置于 25 mL 容量瓶中并加入5%亚硝酸钠溶液 1mL 摇匀,放置 6 min,加 10% 氯化铝溶液1 mL 摇匀,放置 6 min,再加 4%氢氧化钠溶液 8 mL 摇匀,然后用 80%乙醇定容至刻度线,摇匀,放置 10 min。同时配制未加对照品只加入显色剂的溶液作为空白对照溶液。在 440nm ~560 nm 波长范围内扫描吸收曲线 [4] 。结果表明在 510nm 处有最大吸光度。
2. 4 显色剂条件的选择
2. 4. 1 亚硝酸钠浓度的选择 精密量取 5 份 2. 1 项下芦丁对照品溶液 4 mL 置于 25 mL 容量瓶中,分别加入 1%、3%、5%、7%、9%浓度的亚硝酸钠溶液 1 mL,摇匀,放置6 min,再加入 10%氯化铝溶液 1 mL,摇匀,静置 6 min,再加入 4% 氢氧化钠溶液 8 mL,然后用 80% 乙醇定容至刻度线,摇匀,放置 10 min。亚硝酸钠浓度在 5%,有最大吸收。在 510 nm 处测得吸光度值,见表 1。
2. 4. 2 氯化铝浓度的选择 精密量取 5 份 2. 1 项下芦丁对照品溶液4 mL 置于25 mL 容量瓶中,分别5%亚硝酸钠溶液1 mL,摇匀,放置 6 min,再分别加入 8%、9%、10%、11%、12%的氯化铝溶液 1 mL,摇匀,放置 6 min,再加入 4% 氢氧化钠溶液 8 mL,然后用 80% 乙醇定容至刻度线,摇匀,放置10 min。氯化铝浓度在 10%,有最大吸收。在 510 nm 处测定吸光度值,见表 1。

2. 4. 3 氢氧化钠浓度的选择 精密量取 5 份 2. 1 项下芦丁对照品溶液4 mL 置于25 mL 容量瓶中,分别5%亚硝酸钠溶液 1 mL,摇匀,放置 6 min,加入 10% 氯化铝溶液 1 m,摇匀,放置 6 min,分别加入 2%、3%、4%、5%、6%的氢氧化钠溶液8 mL,然后用80%乙醇定容至刻度线,摇匀,放置10 min。氢氧化钠浓度在 4%,有最大吸收;在 510 nm 处测定吸光度值,见表 1。
2. 5 标准曲线的绘制

精密量取芦丁对照品溶液 0. 0 mL,3. 0 mL,4. 0 mL,5. 0mL,6. 0 mL,7. 0 mL,8. 0 mL 分别置于 25 mL 容量瓶,按 2. 3项下方法操作。在 510 nm 波长处测定吸光度,以吸光度 A为纵坐标,浓度 C 为横坐标绘制标准工作曲线,得回归方程:Y =0. 081 7 X -0. 001 8,相关系数:R 2 =0. 999 5。线性范围0. 024 ~0. 064 g·L-1 ,见图 1。芦丁对照品在 510 nm 波长处吸光度标准曲线

2. 6 稳定性实验

按 2. 3 项下方法配制 6 份芦丁对照品溶液,显色后,放

置 10 min、20 min、30 min、40 min,、50min、60 min 在 510 nm波长处分别测定吸光度值,见表 2。

2. 8 加样回收率实验
精密称取约 20 mg 研细过筛的葎草样品 5 份,按 2. 2 项下方法配制,分别置于 25 mL 容量瓶中,分别加入 0. 5 mL、1. 0 mL、1. 5 mL、2. 0 mL、2. 5 mL 的对照品溶液,按 2. 3 项下
方法。在 510 nm 波长处测定吸光度值,见表 4。
2. 9 样品含量的测定
取葎草 3 份,按 2. 2 项下方法配制,按 2. 3 项下方法操作,在 510 nm 波长处测定吸光度值。

2. 10 提净实验
分别取 2. 8 中 3 份提取黄酮后的葎草残渣,再按 2. 2 项下方法提取 1 次,按 2. 3 项下方法操作。测吸光度值平均值为 0. 000 01,表明用 50 mL 80%乙醇超声提取 5 次葎草中的总黄酮已基本提净。

草、益母草、炮附子、党参与生地黄,在月经期后使用乌鸡白凤丸,该疗法的有效率约 75% [11] ;③将治疗划分为行经期与经间期。在经间期进行益气养阴,选取知母、墨旱莲、白术、党参、黄芪、生地黄、女贞子、白芍 8 味药材,在行经期另外添加 5 味药材:乌贼骨、生蒲黄、椿白皮、茜草与地榆炭;④人为地把治疗周期分为卵泡期、排卵期、黄体期与月经期。特别需要注意的是,在最后一个时段,即月经期,需注意药材选择,进行区别用药。


3 中西医结合治疗
中西医结合是当今医疗界的潮流与发展趋势,中医固本,西医检查手段先进,两者的结合能够进一步提高治疗效果。目前,在中西结合治疗崩漏方面,有不同观点。王锦华等[11] 选取甘草、党参、海螵蛸、三七、茜草、地榆炭、艾叶、当归、黄芪、白芍、补骨脂这些中药材,在西医方面借助雌孕激素序贯疗法、抗贫血治疗、诊断性刮宫、宫缩剂、止血剂,对崩漏患者进行治疗,有效率约 97. 0%;肖静等
 取八珍汤加味
与安宫黄体、乙烯雌酚这两类西药,综合治疗崩漏。经期第 5 天使用中药方,在 5 ~22 d 使用安宫黄体 10 mg,每日1 次,22 ~27 d 使用乙烯雌酚,每日 1 次。
综上所述,中药治疗功能性子宫出血的临床,主要包括中医辨证施治,中药周期疗法,中西结合治疗等。
 


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